“Salting out”
Esta técnica usa uma solução
de elevada concentração de sal que compete com a proteína na ligação à coluna.
Como esta tem maior afinidade para a carga dos sais do que para a das
proteínas, estas acabam por ser libertadas, mantendo-se os sais ligados à
coluna.
As proteínas com fracas interacções iónicas serão libertadas com uma
concentração baixa de sal. A adição de sal deverá ser feita de uma forma
gradual e, no final, para ter a certeza que todas as proteínas foram libertadas
da coluna, deve ser colocado nesta uma solução de concentração de sal de
2-3mol/L.
Para remover os sais da
solução de proteínas deve ser feita uma diálise contra tampão.
As mudanças no pH
alteram a carga das proteínas, por isso é necessário conhecer o seu ponto isoelétrico
(pH a que a carga da proteína é 0) e certificar-se de que o pH do sistema está
convenientemente ajustado e tamponado.
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